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SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳

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SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳

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蛋白實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

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項(xiàng)目介紹

聚丙烯酰胺凝膠電泳（Polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE），是一種常用的根據(jù)蛋白質(zhì)分子量大小分離樣本中蛋白質(zhì)和多肽的技術(shù)。PAGE有非變性聚丙烯酰氨凝膠電泳（Native-PAGE）和變性聚丙烯酰氨凝膠電泳（蛋白質(zhì)變性劑通常為SDS）。Native-PAGE過程中蛋白質(zhì)能保持完整狀態(tài)，并依據(jù)分子量大小、形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開。而SDS-PAGE僅根據(jù)蛋白質(zhì)亞基分子量的不同就可以分開蛋白質(zhì)。

樣品要求

1.檢測組織量要求為100mg（即黃豆大小）；

2.細(xì)胞量要求為10^6及以上，細(xì)胞收集方式——貼壁細(xì)胞：倒掉培養(yǎng)基，pbs清洗2-3次，用細(xì)胞刮收集細(xì)胞，2000g，離心5min，然后去掉上清液，細(xì)胞沉淀干冰運(yùn)輸；懸浮細(xì)胞：2000g，離心5min，然后收集細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸；

3.血液樣本：全血采用EDTA-抗凝管裝，至少1ml，4度運(yùn)輸，血清或白細(xì)胞采用干冰運(yùn)輸；

4.剩余樣本需要返還的項(xiàng)目，需要提前備注。在收到項(xiàng)目完整版結(jié)題報(bào)告一個月內(nèi)告知公司，逾期樣本將安排清理。如果樣本特別珍貴，需提前說明。一般情況下，樣本不予返還；樣本返回需要送樣方承擔(dān)返還費(fèi)用（主要是干冰費(fèi)和快遞費(fèi)）。

項(xiàng)目案例

常見問題

1、1.如何讀取SDS-PAGE結(jié)果

電泳后肉眼無法觀察到蛋白分離，需要后續(xù)的染色技術(shù)。考馬斯亮藍(lán)染色和銀染是常規(guī)檢測和定量電泳分離蛋白質(zhì)的常用方法。經(jīng)過固定-染色-脫色等簡單處理后，可以清楚的觀察到蛋白質(zhì)的分布。

2、2.如何儲存SDS-PAGE凝膠

通常在每次實(shí)驗(yàn)之前準(zhǔn)備新鮮的SDS-PAGE凝膠。然而凝膠也可以在4℃的清水的儲存約一周。如果凝膠染色后不能及時拍照，則需要將其放入水中，以防止凝膠干燥和收縮。建議盡快拍攝染色結(jié)果，如果凝膠長時間浸泡在水中，條帶會散開

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